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固相合成多肽的反應(yīng)原理

固相合成多肽的反應(yīng)原理
  固相中的接肽(固相合成多肽)反應(yīng)原理與液相中的基本一致,將兩個(gè)相應(yīng)的氨基被保護(hù)的及羧基被保護(hù)的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵,要形成酰胺鍵,經(jīng)常用的手段是將羧基活化,變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強(qiáng)的失去劑(如碳二亞氨)形成對(duì)稱酸酐等方法來(lái)形成酰胺鍵。其中選用DCC、HOBT或HOBT/DCC的對(duì)稱酸酐法、活化酯法接肽應(yīng)用*廣。
  裂解及(固相合成多肽)合成肽鏈的純化 BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護(hù)基,F(xiàn)MOC法直接用TFA,有時(shí)根據(jù)條件不同,其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護(hù)方法也被采用。合成肽鏈進(jìn)一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等。
  典型的操作常由兩綬沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見(jiàn)分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那么大小是8×100(3-10μm)和25×250mm(10μ m)。

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